Формирование β-структур и фибриллярных ассоциатов молекулами инсулина НовоРапид в присутствии клеточных стенок дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Прозоров М.А., Рекстина В.В., Кудряшова И.Б., Драгони О.А., Зиганшин Р.Х., Камзолкина О.В., Калебина Т.С.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва
Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

Целью исследования явилось изучение способности препарата инсулина НовоРапид формировать β-структуры и фибриллы в присутствии и отсутствии индукторов. Изучение процесса формирования β-структур проводили с помощью флуоресцентной спектроскопии с использованием специфического красителя Тиофлавина Т. Способность инсулина к фибриллообразованию изучали с помощью электронной микроскопии. В качестве индуктора применяли препараты клеточных стенок (КС) дрожжей Saccharomyces cerevisiae, содержащих и не содержащих белок с амилоидными свойствами Bgl2p. Отсутствие Bgl2p в КС было обусловлено делецией кодирующего его гена. С помощью LC-MS/MS-анализа было показано, что набор белков, ковалентно и нековалетно закреплённых на молекулах полисахаридов КС указанных дрожжей, одинаков и отличается только отсутствием Bgl2p в случае штамма bgl2Δ. Показано, что в среде инкубации инсулина НовоРапид, к которой в качестве индуктора были добавлены клеточные стенки дрожжей дикого типа, не только увеличивается интенсивность флуоресценции тиофлавина Т при длине волны 485 нм, но и обнаруживаются фибриллярные структуры, достигающие в длину нескольких микрометров. Результаты работы позволяют предположить, что Bgl2p может рассматриваться как индуктор процесса фибриллообразования с участием инсулина НовоРапид, при этом другие компоненты КС участвуют в индукции формирования β-структур в молекулах этого инсулина.