Цитометрическая оценка интенсивности повреждения гранулоцитов крови привитых против чумы морских свинок при взаимодействии с Yersinia pestis на модели бактериемии ex vivo

Кравцов А.Л., Гончарова А.Ю., Клюева С.Н., Бугоркова С.А.

Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора, Саратов

Нейтрофильные гранулоциты (НГ) играют важную роль в механизмах формирования иммуноаллергических реакций и способны посредством нетоза уничтожать внеклеточные патогены. Цель работы заключалась в оценке методом проточной цитометрии интенсивности повреждения НГ в крови иммунизированных против чумы и интактных морских свинок при моделировании чумной бактериемии ex vivo.
Материалы и методы. Морских свинок (26 особей) иммунизировали подкожно вакцинным штаммом Y. pestis EV НИИЭГ и тремя его изогенными производными, группу сравнения составляли интактные животные. На 21-е сутки иммуногенеза у морских свинок опытных групп и группы сравнения забирали кровь из сердца в объёме 4-5 мл. Бактериемию моделировали ex vivo добавлением в образцы крови 108 м.к./мл чумного микроба, выращенного при 37°С (Yp37), 28°С (Yp28) или инактивированные нагреванием при 60°С культуры – DYp28 и DYp37. Для каждой из групп контролем служили образцы крови без добавления бактерий. Через 4 ч инкубации ex vivo образцы фиксировали и обеззараживали с помощью реактива BD FACS Lysing solution и учитывали реакцию НГ методом проточной цитометрии. При оценке реакции НГ повреждёнными считали клетки, утратившие исходно высокую степень гранулярности в процессе секреторной дегрануляции и цитолиза. Показатель повреждения нейтрофилов (ППН) вычисляли как Дк – До/Дк, где До и Дк – относительное содержание НГ с исходной степенью гранулярности соответственно в опыте и контроле.
Результаты. Только в образцах крови предварительно иммунизированных животных регистрировали дегенеративные изменения гранулоцитов в ответ на добавление ex vivo в кровь Yp37. Отмечено, что реакция НГ у животных, иммунизированных вакцинным штаммом, была в 3 раза выше, чем у морских свинок, иммунизированных изогенными вариантами этого штамма, которые в 200 раз менее эффективно защищали морских свинок от чумы.
Заключение. Результаты цитометрической оценки ППН на модели чумной бактериемии ex vivo могут быть использованы для характеристики выраженности поствакцинального противочумного иммунитета.