Методы определения и виды каталитической активности поликлональных иммуноглобулинов класса А

Генералов И.И., Коротина О.Л., Жерулик С.В., Генералова А.Г., Волкова М.В.

Витебский государственный медицинский университет

Целью настоящей работы стала разработка методов определения оксидоредуктазной, протеолитической и нуклеазной абзимной активности IgA, выделенных из сывороток пациентов системной красной волчанкой (СКВ), ротовой жидкости здоровых лиц и пациентов с хроническим периодонтитом, и оценка параметров их каталитической активности.
Методы. Изучены различные методы выделения IgA из сыворотки и ротовой жидкости для дальнейшей оценки их абзимной активности. Наилучшие результаты получены с применением метода аффинной хроматографии на матрице, конъюгированной с антителами против тяжелой цепи IgA человека.
Предложены методы определения каталитической активности IgA. ДНКазную абзимную активность определяли разработанным собственным методом по риваноловому сгустку ДНК, протеолитическую эластазную, катепсиноподобную и амидазную определяли фотометрическим методом в реакциях с субстратами Glp-Pro-Val-p-нитроанилидом, N-сукцинил-Ala-Ala-Pro-Phe-p-нитроанилидом, Gly-Phe-p-нитроанилидом, Z-Arg-Arg-p-нитроанилидом, бензоил-аргинин-р-нитроанилидом. Каталазную активность оценивали в реакции перекиси водорода с молибдатом аммония, пероксидазную – в реакции с тетраметилбензидином. Изучалась кинетика абзимных реакций и их зависимость от рН реакционной смеси.
Результаты. Показано, что для абзимных IgA с пероксидазной и эластазной активностью характерна гетерогенность по скорости каталитических реакций и по зависимости реакций от рН среды. Ряд образцов абзимных IgA имеет не менее 2-х оптимумов рН в слабокислой и щелочной зонах.
Установлено также, что IgA, выделенные из ротовой жидкости пациентов с хроническим периодонтитом, обладают наиболее высокой эластазной, пероксидазной и ДНКазной активностью, которая достоверно (p<0,01-0,001) превышает активность IgA ротовой жидкости здоровых лиц и IgA сывороток пациентов СКВ. Абзимной активности, характерной для катепсинов В или С, выявить не удалось.