Метод определения нейтрофилов и нейтрофильных внеклеточных ловушек в биологических жидкостях с помощью двойного окрашивания

Генералов С.И., Ищенко О.В., Коневалова Н.Ю., Фролова А.В., Жерулик С.В., Павлов Ю.А., Сушкова С.А.

Витебский государственный медицинский университет

Нетоз – недавно открытый способ гибели нейтрофилов, при котором образуются нейтрофильные внеклеточные ловушки. Эти структуры играют важную роль во многих патологических процессах. Целью данного исследования являлось создание способа определения нейтрофильных внеклеточных ловушек в биологических жидкостях путем детекции специфического для нейтрофилов фермента – нафтол-AS-D-хлорацетатэстеразы и внеклеточной ДНК с использованием световой микроскопии. Разработанный метод основан на реакции азосочетания азотированного фуксина с α-нафтолом. В качестве материала для исследования использовали суспензии нейтрофилов, полученные из венозной крови здоровых доноров, асцитическую жидкость и мокроту. В материале определяли содержание сегментированных и десегментированных нейтрофилов, нейтрофильных внеклеточных ловушек, цитопластов. Выполнено сравнение данного метода с разработанным ранее методом определения нейтрофильных внеклеточных ловушек с помощью красителя Fast Corinth V Salt.

В результате работы получен доступный для использования в клинико-диагностических лабораториях способ двухкомпонентного окрашивания нейтрофильных внеклеточных ловушек, определена внеклеточная активность нейтрофилов в биологических жидкостях данным методом.